第七章 色譜法
第一節 概述
色譜法：是一種物理或物理化學分離方法。用于定性鑒別、純度檢查、含量測定。
分配系數：組分在固定相和流動相之間的分配平衡時的濃度之比。 k=
容量因子：又稱質量分配系數，即達到分配平衡后，組分在固定相和流動相中的質量之比。
第二節 薄層分析法
一般指吸附薄層色譜法，固定相為吸附劑的薄層吸附法。k值越大隨展開劑移動的速度越慢。
比移徝：在薄層色譜法中，組分的遷移距離( )與展開劑的遷移距離( )之比稱為比移值( ) 。
r 最佳范圍是0.3-0.5 ，可用范圍是0.2-0.8 。
吸附劑：吸附薄層色譜法的固定相。常用吸附劑有：硅膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素和聚酰胺。
硅膠：在105-110 c加熱30分，使硅膠吸附力增加，稱為活化。具微酸性，適分離酸性中性物質。
氧化鋁：堿性、中性、酸性。中性用得多。
制備薄層板：要求吸附劑涂布均勻表面光滑，使用前檢查均勻度。2000版用機械涂布法。活化。
吸附劑與展開劑的選擇：分離極性較強的組分時，宜選用活性低(活度級別高)的薄層板，以極性強的展開劑展開。反之
點樣：體積宜在20ul 以下，樣徑不超過2-3mm ，點間距離為1.5-2.0cm，距底2.0cm 。
顯色方法：直接噴霧法、浸漬法、壓板法。
定性分析方法、純度檢查、定量分析方法(洗脫測定法和直接測定法)。
第三節 氣相色譜法
氣相色譜法：以氣體為流動相的色譜法稱為氣相色譜法。不適用于難揮發和熱穩定性差的物質分析。
原理：各組分在固定相與載氣(流動相)間分配系數不等，按大小依次被載氣帶出色譜柱，小先流出。
一、基本原理：
(一)、基本概念：
一個組分的色譜峰用三項參數：峰高或峰面積(用于定量)、峰位(用保留值表示，用于定性)、峰寬(用于衡量柱效)。
(1)、保留時間 (tr) ：從進樣開始到某個組分的色譜峰頂點的時間間隔。
(2)、死時間 (t0)：分配系數為零的組分的保留時間。
(3)、相對保留值 (r)：兩組分的調整保留值之比。
(4)、半峰寬 (wh/2)：峰高一半處的峰寬。
(二)、塔板理論：
塔板理論方程式(高斯方程式)：
理論塔板式數： 理論塔板高度：
(三)、速率理論： h=a+b/u+cu
影響塔板高度的因素：1、渦流擴散 2、縱向擴散 3、傳質阻抗
二、氣相色譜儀：
(1)、色譜柱：固定相與柱管組成。 填充柱、毛細管柱； 分配柱、吸附柱
(2)、固定液：高沸點的液體，操作下為液態。 甲基硅油、聚乙二醇等
選擇原則：按相似性、按主要差別、按麥氏差別選擇。
(3)、載體：化學惰性的多孔性微粒
(4)、毛細管色譜柱：開管型、填充型
(5)、檢測器：1、濃度型檢測器：熱導檢測器和電子捕獲檢測器
2、質量型檢測器：氫焰離子化檢測器
中國藥典2000對氣相色譜規定：除檢測器種類、固定液品種及特殊指定的色譜柱材料不得任意更改外，其他均可適當改變，色譜圖于30min內記錄完畢。
第四節 高效液相色譜法
1、 基本原理：影響柱效的主要因素是渦流擴散和傳質阻抗。
分類：1、液固吸附色譜法：流動相為液體，固定相是固體吸附劑。
2、液--液分配色譜法：固定相幾乎全是化學鍵合硅膠，又稱化學鍵合相色譜法。
按固定相和流動相的極性2又分：正相色譜法和反相色譜法
正相色譜法：流動相極性小于固定相極性的色譜法。用于分離溶于有機溶劑的極性及中等極性的分子型物質，用于含有不同官能團物質的分離。 極性弱組分先流出
反相色譜法：……………大于……………………… 用于分離非極性至中等極性的分子型化合物
2、 高效液相色譜儀：
1、高壓輸液泵 2、色譜柱 3、進樣閥
4、檢測器：紫外吸收檢測器、熒光檢測器、差示折光檢測器、電化學檢測
中國藥典2000對高效液相色譜法規定：除固定相種類、流動相組分、檢測器類型不得任意更改外，其余均可適當改變，色譜圖于20min內記錄完畢。
第5節 色譜系統適用性試驗和定量分析方法
一、系統適用性試驗
1、 色譜柱的理論板數：
2、 分離度：應大于1.5
3、重復性
3、 拖尾聲因子：0.95-1.05之間
二、定量測定法：
1、內標法加較正因子測定供試品中某個雜質或主成分含量
2、外標法測定供試品中某個雜質或主成分含量
3、加較正因子的主成分自身對照法
不加較正因子的主成分自身對照法
第六節 電泳法
電泳法：在電場的作用下，依據各組分之間淌度的不同實現分離的方法。分離程度取決于淌度之差。
一、基本原理： 電泳遷移速度為：電泳淌度：電場強度
影響電泳分離的條件：1、緩沖液的ph值和離子強度 2、電場強度 3、樣品濃度
二、電泳儀：
3、 各類電泳法：
(1)、紙電泳法 (2)、醋酸纖維素電泳法：主要用于測定蛋白質相對百分含量
(3)、瓊脂糖凝膠電泳法： (4)、聚丙烯酰胺凝膠電泳法
(5)、sds聚丙烯胺凝膠電泳法：測定蛋白質的分子量
四、毛細管電泳法簡介：以彈性石英毛細管為分離通道，高壓直流電場為驅動力，依據樣品中各組分之間的淌度和分配行為上的差異而實現分離的分析方法。
